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Professeur de musique, il fut à l'origine du système de dénomination des notes de musique, basé sur les premiers mots d'un chant religieux latin, l'Hymne à Saint-Jean Baptiste de Paolo Diacono (vers 720 - 799):
Guido d'Arezzo a également apporté sa contribution à la traduction des mélodies par son invention nommée hexacorde, ancêtre de la portée actuelle, où chaque note avait une position absolue et non plus relative comme dans les neumes.